„Jei mūsų pirminius rezultatus galės pakartoti kitos laboratorijos, jie pakeis požiūrį, kurį šiuo metu galvojame apie Alzheimerio ligos priežastis“, - sako Aukštosios mokslinių tyrimų tarybos (CSIC) mokslo profesorius dr. Ramón Trullas. ) Barselonos Biomedicininių tyrimų institute ir pagrindinis tyrimo autorius. Jo manymu, šis atradimas galėtų leisti ieškoti efektyvesnių gydymo būdų ikiklinikinėje fazėje.
Šiuo metu vienintelis būdas tiksliai diagnozuoti ligą yra postmortemo neuropatologinė analizė. Ryšys tarp žinomų biomarkerių su negalavimu yra neaiškus, todėl beveik neįmanoma tiksliai diagnozuoti ikiklinikinių stadijų.
CSIC tyrėjai savo darbe rodo, kad mitochondrijų DNR (mtDNR) kiekio sumažėjimas CSF gali būti ikiklinikinis Alzheimerio ligos rodiklis; ir, kita vertus, kad gali būti tiesioginis priežastinis ryšys. Hipotezė yra tokia, kad mitochondrijų DNR lygio sumažėjimas CSF atspindi mitochondrijų gebėjimo maitinti smegenų neuronus sumažėjimą, kuris sukelia jų mirtį.
MtDNR koncentracijos sumažėjimas vyksta prieš gerai žinomų Alzheimerio biocheminių biomarkerių (beta-amiloidų 1-42, T-tau ir p-tau baltymų) atsiradimą, kas rodo, kad Alzheimerio ligos patofiziologinis procesas Jis prasideda anksčiau, nei manyta anksčiau, ir kad jo išsiskyrimas mtDNR gali būti vienas iš pirmųjų ligos numatytojų.
Be to, kad galima ištirti galimą mtDNR ryšį ir Alzheimerio ligos progresavimą, mtDNR naudojimas kaip ikiklinikinės Alzheimerio ligos indeksas suteikia svarbų pranašumą prieš ankstesnius biocheminius žymenis: šio naujojo nukleorūgšties biomarkerio nustatymas. Jam trūksta techninių sunkumų, susijusių su baltymų aptikimu. MtDNR galima lengvai įvertinti kiekybiniu arba realaus laiko PGR (qPCR) arba „Doplet Digital PCR“ (ddPCR) būdu.
Prieš šį tyrimą mokslininkai nepranešė, kad žmogaus CSF gali būti aptiktos laisvos ląstelės, cirkuliuojančios mtDNR. Tačiau atlikus šį tyrimą, Dr Trullas komanda sugebėjo kiekybiškai aptikti ir atkurti mtDNR naudodama qPCR, atidžiai optimizuodama laikydamasi MIQE gairių.
Absoliutus tikslinių molekulių kiekybinis įvertinimas
Norėdami patvirtinti savo rezultatus su qPCR, mokslininkai panaudojo „QX100 Droplet Digital Digital PGR“ sistemą iš „Bio-Rad Laboratories“. Skirtingai nuo qPCR tyrimų, QX100 sistema suteikia absoliučią DNR tikslinių molekulių kiekybinę vertę, nereikalaujant standartinės kreivės. Svarbus CSF analizės veiksnys buvo tas, kad, naudojant „Doplet Digital PCR“ sistemą, nereikia išvalyti mėginio, kad būtų pašalinti PGR inhibitoriai, kaip tai būtina atliekant qPCR tyrimus.
„Doplet Digital PCR“ leido mums patvirtinti pradinius qPCR matavimus, nes jis suteikia absoliučią kiekybinę vertę vienos molekulės lygmenyje, nesiremiant į standartinę kreivę “, - aiškina Trullas. „Technologijoms plačiau įsigalint, mes tikimės, kad ddPCR bus mitochondrijų DNR aptikimo smegenų skystyje skysčių ateitis“, - priduria jis.
Dr Trullas tikisi, kad kitos laboratorijos ir ligoninės sėkmingai atkartos jo grupės tyrimų rezultatus, kurie patvirtintų, kad reikėtų ištirti sumažintą mtDNR kiekį kaip galimą Alzheimerio ligos priežastį. Suradę būdą, kaip užkirsti kelią šiam išsigimimui, gydytojai gali padėti diagnozuoti ir gydyti Alzheimerio ligą prieš pasireiškiant simptomams.
Šaltinis: www.DiarioSalud.net
